ASTM F720-24 豚鼠接触性过敏原测试的标准试验方法：豚鼠 最大值测试（中文）

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1
标准测试方法
该国际标准是根据世界贸易组织技术性贸易壁垒（TBT）委员会发布的《关于制定国际标准、指南和建议的原则的决定》所确立的国际公认标准化原则制定的。
代号:F720-24
国际的
豚鼠接触性过敏原测试：豚鼠
最大值测试
本标准以固定编号F720发布；紧随该编号后的数字表示原文件的年份。
采用年份或修订时的最后修订年份。括号内数字表示最后重新批准年份。上标
ε(e)表示自上次修订或重新批准以来的编辑变更。
1.范围
1.1 本试验方法旨在评估受试物引发接触性皮肤致敏性
的可能性。该方法为半定量检测法，目前尚未发现已知局
限性。
1.2 以国际单位制（SI）单位表示的数值，包括官方认
可的SI单位，均应视为标准值。本标准未包含其他计量系
统。
1.3
本标准不声称涵盖其使用过程中可能涉及的所有安
全问题（如有）。用户有责任在使用前建立适当的安全、
健康及环境实践，并评估监管限制的适用性。
1.4
本 国 际 标 准 依 据 世 界 贸 易 组 织 技 术 性 贸 易 壁 垒
（
TBT
）委员会发布的《国际标准、指南和建议制定原则
决定》中确立的国际公认标准化原则制定。
2.参考文献
2.1 ASTM
标准：
²
F619医疗器械用材料的提取方法
2.2 ISO
标准：
³
ISO 10993-10医疗器械生物学评价—第10部分：皮肤致
敏试验
3.测试方法概要
3.1 在包含皮内注射受试物（含与不含弗氏完全佐剂）的两阶
段诱导后
！本试验方法由ASTM委员会F04（医用和外科材料与器械）管辖，且由生物相
容性试验方法分委会F04.16直接负责。
现行版本于2024年12月1日批准。发布于2024年12月。最初于1981年批准。上一
版本最后批准于2017年，编号为F720-17。DOI：10.1520/F0720-24。
²如需参考ASTM标准，请访问ASTM网站www.astm.org，或联系ASTM客户服务
www.astm.org/contact。如需获取ASTM标准年鉴卷信息，请参阅ASTM网站上标准
的文件摘要页面。
ch.de
http://www.iso.org
³Available 国际标 准化组 织（ISO），1，la Voie-Creuse，CP56，CH-1211
日内瓦20，瑞士， .
在应用部位预先用十二烷基硫酸钠（SLS）处理后，局部
涂抹受试物（FCA）并封闭，随后将浸渍受试物（例如提
取物）的贴片贴于豚鼠皮肤未经处理的部位。24小时后移
除贴片，检查皮肤是否存在过敏反应，并在移除后24小时
和48小时对反应强度进行评分。
4.意义与应用
4.1 在选择用于医疗应用中与人体接触的新材料时，必须
确保该材料不会刺激免疫系统引发过敏反应。该实践提供
了通过将受试物涂抹于豚鼠皮肤上，评估材料或器械中化
学物质可能渗出并引发过敏反应的建议。这一实践的理论
依据在于豚鼠已被证实是预测人类接触性过敏性皮炎的敏
感动物模型。4 FCA（皮肤接触过敏试验）和SLS（皮肤接
触刺激试验）的使用往往会增强材料引发过敏的潜在风
险。因此，尽管该测试不能保证材料无致敏性，但作为当
前常用敏感动物试验之一，其仍具有重要价值。
5.试剂与材料
5.1 Hartley
应 变 豚 鼠 ， 雄 性 或 雌 性 （ 未 产 仔
且 未 妊
娠），300至500克。
5.1.1 每种受试物使用10只动物，每种载体对照物使用5
只动物。例如，若对某器械的极性与非极性提取物均进行
测试，则试验中总计需30只动物（每种极性/非极性测试提
取物各10只动物，每种极性/非极性载体对照物各5只动
物）。
5.2 FCA
。
5.3
闭塞手术胶带，宽度
3.75
厘米。
5.4
弹性绷带
5.5 SLS（10%重量百分比）溶于USP凡士林中。
4Magnusson，B.和Kligman，A.M.，“通过动物试验鉴定接触性过敏原。豚鼠最
大化试验”，《研究性
皮肤病学杂志，第
52
卷，第
3
期，
1969
年，第
268-276
页。
版权所有 © ASTM国际，地址：宾夕法尼亚州西康肖霍肯市100 Barr Ha bor Drive，邮政信箱C700，邮编19428-2959，美国
2
F720-24
5.6
阳性对照品—如果阳性对照品与受试品同时运行，
则使用
5
只动物
。但是，如果阳性对照品不与受试品同时
运行，则应至少每6个月使用10只受试动物和5只阴性对照
品进行一次阳性对照品试验。
5.6.1 可 采 用 以 下 阳 性 对 照 ： 肉 桂 酸 己 酯 醛
（HCA），mercaptobenzothiazole，2,4-dinitrochlorobenzene
（DNCB），或甲醛（用于水溶性受试物）。
⁵
注1—理想情况下，检测实验室应使用温和至中度致敏剂（如
HCA 或巯基苯并噻唑）作为阳性对照，以确保测试系统对评估设备
致敏潜力的敏感性。诱导和激发阶段选择的浓度应能产生中度致敏
反应。例如，文献报道显示，使用5000 ppm（即0.5%）浓度的 HCA
进行诱导，1000 ppm（0.1%）浓度进行激发时，可观察到50%的致
敏率。 若使用强致敏剂（如2,4-二硝基氯苯， DNCB）作为阳性对
照，则诱导阶段应使用0.1%至0.5%的浓度，
0.05 80%至0.1%用于激发试验，致敏率应至少 %。
6.供试品与对照品的制备
6.1 在豚鼠致敏试验中，每次诱导暴露所用测试化学品
（如受试物提取物）的浓度应确保全身耐受性良好。对于
已知或预期具有刺激性的受试物，局部诱导阶段应使用仅
引起轻度至中度红斑但不会对动物造成其他不良影响的最
高浓度。对于非刺激性受试物（如大多数器械提取物），
需在局部诱导阶段使用刺激性化学物质（如10%十二烷基
硫酸钠）对施用部位进行预处理，该预处理应在测试贴片
施用前24小时完成。挑战暴露阶段的浓度应为最高非刺激
性剂量。
6.2 在必要时应进行初步测试，以确定主试验中用于诱
导暴露和挑战暴露的受试物浓度。通常情况下，对于用生
理盐水或油制备的器械提取物，无需进行确定最高非刺激
浓度的初步测试，直接使用纯提取物（即100%纯度）进行
测试。若需进行初步测试，可采用以下方法：将受试物的
不同稀释度置于封闭敷料下，局部涂抹于至少两只动物的
侧腹部位，24小时后使用表1中描述的Magnusson和Klig-
man分级量表，评估涂抹部位是否出现红斑和水肿。
6.3
皮内注射用药品
6.3.1
水溶性成分或盐水提取物：
6.3.1.1 将水溶性成分溶解至其最大溶解度，或按照实
践F619所述获得盐水提取液。
5Nakamura，Y.等，《豚鼠致敏试验、佐剂试验、斑贴试验与Buehler试验三种皮
肤致敏试验中50%阳性反应诱导浓度与激发浓度的定量比较》，《毒理学科学杂
志》，第24卷第2期，1999年，第123-131页。
表1 Magnusson 和Kligman 量表
斑贴试验反应 分级量表
无明显变化 0
离散性或斑片状红斑 1
中度融合性红斑 2
严重红斑和/或肿胀 3
6.3.1.2 6.3.1.1将 和FCA中描述的受试物等体积混合。通
过连续剧烈涡旋混合至少5分钟进行均质化。同样地，对
于载体对照组，将提取载体/溶剂与FCA等体积混合。当滴
液置于水冰浴表面时保持完整，即表明乳化完成。
6.3.1.3 同时将成分溶于水或生理盐水提取液中，配制
成相同浓度且不含FCA的溶液。
6.3.2
油溶性成分：
6.3.2.1 将油溶性成分溶解于FCA中。
6.3.2.2 将等体积的FCA溶液中的油溶性组分溶液与等体
积水混合，通过旋转搅拌器在均质化过程中缓慢加入水。
持续剧烈搅拌至少5分钟以实现均质化。当水冰浴中置于
水面的液滴保持完整时，即表明乳化过程完成。
6.3.2.3 同时将成分配制成不含FCA的等浓度溶液。
6.3.3
植物油提取液
6.3.3.1 将按照操作规范F619获得的等体积油提取液与等
体积FCA混合。同样地，对于溶剂对照组，将等体积的提
取溶剂与FCA混合。
6.3.3.2 同时将提取物配制成不含FCA的等浓度水溶液。
6.3.4
替代性样品制备——作为样品提取的替代方法
，
建议考虑采用ISO 10993-10:2021附录B中所述的方法进行
聚合物材料的提取。
6.3.5 6.3.1-6.3.3.2制备符合 要求的对照品。
注2—若可疑过敏原的最终浓度导致溃疡、坏死或全身毒性等有害
效应，则应使用最大耐受浓度。
6.4
外用制剂
6.4.1 液体——对于所有液体，应使用不会对受试动物
整体 健康 造成 过度 刺激 或有 害的 最高 浓度 。（参 见注
2。）
6.4.1.1 对于油混溶性液体，必要时可用凡士林稀释。
6.4.1.2 对于水混溶性液体，必要时可用水稀释。
7.供试品与对照品的操作规程
7.1
诱导：
7.1.1
皮内注射
7.1.1.1 剪除每只豚鼠肩部区域的毛发，暴露4×6厘米的区域。
7.1.1.2 应在脊柱两侧各确定三个注射部位，各部位间至少间
隔1.5厘米。皮内注射
F720-24
3
随后按如下所示进行注射，其中注射部位1位于动物头部最近处。
(1)
该反应可能由刺激而非致敏引起，因为对照组动物此前未
接触过受试物。
位点1—0.1 mL 50:50（v/v）的FCA与所选溶媒混合液
7.2.4.2
(2)试验部位2—0.1 mL不含佐剂的供试样品用于试验动
物；0.1 mL不含佐剂的提取溶剂/溶剂用于对照动物
(3)试验部位3—0.1 mL 1:1混合液（含50:50（v/v）FCA/
所选载体混合液[试验部位1所用溶液]与受试物[试验部位2
所用]）用于试验动物；0.1 mL 1:1混合液（含50:50（v/v）
FCA/所选载体混合液[试验部位1所用溶液]与提取载体/溶剂
[试验部位2所用]）用于对照动物
在方案2中，对照组动物不给予受试物，而实验
组动物也不给予对照物。若在实验动物中观察到皮肤反
应，但未进行初步测试以确定受试物的最高非刺激浓度
（建议在激发阶段应用时采用最高非刺激浓度），则可能
需要额外测试以排除假阳性结果。对于医疗器械提取物的
测试，通常不会进行初步测试以确定提取物的最高非刺激
浓度。
7.1.2.1 7.2.5
皮内注射后一周（7±1天），夹闭豚鼠的测试区
域（皮内注射部位）。
7.1.2.2
7.1.2.4
将供试品（浸透供试品的滤纸）和对照品（浸透
对照溶媒的滤纸）贴于诱导阶段未处理的剃毛部位（如每
只动物的上侧腹），并按照 所述用封闭性手术胶带
和弹性绷带固定。
7.2.6 将样本置于原位24±2小时。
若受试样本无刺激性，则需在贴敷试验贴片前24
小时，用10%十二烷基硫酸钠（SLS）的凡士林溶液处理每
个试验区域。使用玻璃棒将SLS按摩入皮肤。在局部应用
试验品与对照品前，应清除残留的SLS。
7.1.2.3 8.1
6.4.1.1
移除贴剂后24小时和48小时阅读挑战部位。根据表
1，对每个挑战部位及每个时间点的红斑和水肿进行评分。
将受试物涂在2×4 cm的定性滤纸上。对于油混溶
性液体，如果它们已经按照 进行稀释，将稀释后的
液体涂在滤纸上，涂成厚而均匀的层。否则，将受试液体
或受试浸提液直接涂在试纸上，直到饱和。
8.2
7.1.2.4 将滤纸贴附于豚鼠注射部位，用3.75厘米封闭性
手术胶带覆盖，并在躯干周围缠绕弹性绷带以固定胶带。
7.1.2.5 静置48±2小时。
7.2
挑战
7.2.1 7.1.2
在 所述诱导后两周（14±1天），执行以下操
作：
7.2.2 在动物侧腹剃除5×5厘米区域。
7.2.3
测试与对照品的交付：
7.2.3.1
需编制24小时和48小时反应的表格清单。若试验组
中Magnusson和Kligman分级达到1级或以上，且对照组动
物分级低于1级，则通常表明存在致敏现象。若对照组动
物出现1级或以上分级，则试验组动物出现的反应超过对
照组最严重反应的，应推定为致敏所致。若反应结果不确
定，建议进行复测以确认首次试验结果。复测应在首次试
验后1至2周进行，采用与首次试验相同的方法，使用动物
的未致敏侧进行。
7.1.2.3
按重量以非刺激性浓度在凡士林中测试固体。按
照 所述，将试样涂布于2×2厘米的滤纸上。
7.2.3.2 在非刺激性浓度下测试液体。按照7.1.2.3所述方
法，将液体涂布于2×2厘米的滤纸上。
7.2.3.3
表2致敏反应分级
将对照车辆涂布于2×2厘米滤纸片上。 <Sensitized> 等级 分类
7.2.4 所有试验动物和对照动物均应接受攻毒处理。 00没有一个
(2) 65至80 增值 强的
对照组动物应给予对照品（局部给药），试验组动
物应给予试验品（局部给药）。若采用生理盐水或植物油
等标准溶剂作为对照/提取载体，则适用此方案。
8.3.1
7.2.4.1
根据所用阳性对照（例如，轻度、中度、重度），
阳性对照应符合表2中规定的致敏频率，以确保试验有效。
9.报告
采用方案1可判定试验动物观察到的皮肤反应是
否由刺激而非致敏引起。由于试验组和对照组动物均接受
试验制剂与对照制剂的给药，若在对照组动物中观察到对
试验制剂的皮肤反应， 9.1 报告应包括以下内容：
8.3 根据表2对受试材料的致敏性进行评级。
81至100 V极其的
8.结果解读
7.1.2
局部应用：
(1) 9至28 IⅡ 温柔的
试验组与对照组动物均应分别接受试验制剂与对照
制剂的局部给药；或 29至64岁Ⅲ有节制的
>0至8微弱的

标签： #ASTM #标准试验方法 #测试

摘要：

1标准测试方法该国际标准是根据世界贸易组织技术性贸易壁垒（TBT）委员会发布的《关于制定国际标准、指南和建议的原则的决定》所确立的国际公认标准化原则制定的。代号:F720-24国际的豚鼠接触性过敏原测试：豚鼠最大值测试本标准以固定编号F720发布；紧随该编号后的数字表示原文件的年份。采用年份或修订时的最后修订年份。括号内数字表示最后重新批准年份。上标ε(e)表示自上次修订或重新批准以来的编辑变更。1.范围1.1本试验方法旨在评估受试物引发接触性皮肤致敏性的可能性。该方法为半定量检测法，目前尚未发现已知局限性。1.2以国际单位制（SI）单位表示的数值，包括官方认可的SI单位，均应视为标准值。本标...

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