美国药典 USP 2025〈201〉薄层色谱鉴定试验

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2/ 12/25, 2:28 PM USP- NF 〈201〉薄层色谱鉴定试验

状态：截至2025年2月12日已正式生效

生效日期：自2018年5月1日起生效

文档类型：通用章节

文档ID：GUID-DC3E6EDA-7CEE-4429-9788-D504DEEC0A1B_2_en-US

DOI: https://doi.org/10.31003/ USPNF_M98950_02_01

DOI Ref: n88df

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〈201〉薄层色谱鉴定试验

操作流程

•一般操作流程

以下流程可作为辅助手段，用于验证多种药典原料药本身及其相应剂型的鉴别。

按照各专论中的指示制备测试溶液。在平行于适宜薄层色谱板边缘且距其约2 cm处（该板表面涂有0.25 mm厚的色谱硅胶混合物层，参见

色谱法〈621 〉），取10 µL 该测试溶液及10 µL 由待测药物活性成分的USP参考标准品配制的标准溶液（溶剂与浓度均与测试溶液相同），

除非各专论另有规定。使斑点干燥后，在氯仿、甲醇和水（180:15:1）混合溶剂体系中展开色谱图（除非各专论另有说明），直至溶剂前沿

移动至色谱板长度的约四分之三处。将色谱板从展开槽中取出，标记溶剂前沿并使其蒸发。除非各专论另有规定，否则可通过短波长紫外

光观察确定色谱板上的斑点位置。从测试溶液中获得的主色斑RF值与标准溶液测得的结果一致。

•巴曲霉素、新霉素及多粘菌素B的制备方法

以下薄层色谱方法可作为辅助手段，用于验证杆菌肽、新霉素和多粘菌素B等活性成分以及其剂型（无论单独存在或存在于二元或

三元混合物中）的鉴别。专论中引用的〈201BNP 〉即表明该方法适用于此目的。

除非个体专论中有特别规定，否则应按以下方法制备测试溶液。

测试溶液

对于原料药：将部分杆菌肽、杆菌肽锌、硫酸新霉素或硫酸多粘菌素B溶解于0.1 N盐酸中，获得浓度分别为每毫升约500 USP杆菌肽单位、

每毫升3.5毫克新霉素（碱基）或每毫升10,000 USP多粘菌素B单位的溶液。

对于溶液：若溶液中含有新霉素和多粘菌素B，则取部分溶液用0.1 N盐酸稀释，获得每毫升含约3.5毫克新霉素（碱基）的等效溶液；若溶液

仅含多粘菌素B而不含新霉素，则取部分溶液用0. 1 N盐酸稀释，获得每毫升含约10,000 USP多粘菌素B单位的溶液。

对于乳膏、洗剂和软膏：若产品中含有杆菌肽或锌杆菌肽，则取相当于约500 USP杆菌肽单位的剂量转移至15 mL离心管中；若产品含有新

霉素但不含杆菌肽或锌杆菌肽，则取相当于每毫升约3.5 mg新霉素（碱基）的剂量转移至15 mL离心管中。向离心管中加入4 mL氯仿，充

分振荡使产品均匀分散；加入1 mL 0.1 N盐酸，涡旋混合4分钟，离心后使用澄清上清液。

[注——可根据下文改良操作步骤所述，使用改良试验溶液替代常规试验溶液。]

标准杆菌肽溶液：将部分USP杆菌肽锌RS溶于0. 1 N盐酸中，获得每毫升含500 USP杆菌肽单位的溶液。

标准新霉素溶液：将部分USP新霉素硫酸盐RS溶于0. 1 N盐酸中，获得每毫升含相当于3.5 mg新霉素（碱基）的溶液。

标准多粘菌素B溶液：将部分USP多粘菌素B硫酸盐RS溶于0. 1 N盐酸中，获得含该成分的溶液。

每毫升含10,000 USP多粘菌素B单位。若受试制剂同时含有杆菌肽或杆菌肽锌，则取部分USP硫酸多粘菌素B RS溶于0.1 N盐酸中，制成每

毫升含500 USP多粘菌素B单位的溶液（其中J为每克乳膏、洗剂或软膏中USP多粘菌素B单位标示量与USP杆菌肽单位标示量之比）。

配制溶剂溶液：将甲醇、异丙醇、二氯甲烷、氢氧化铵和水按4:2:2:2:1.5的比例混合。

操作步骤：取10 µL 测试溶液及各相关标准溶液分别点样于合适的薄层色谱板上（参见说明）。

色谱法（ 621 ）：使用涂有0.25毫米层色谱硅胶的板。将板置于预饱和色谱箱中，用显色溶剂系统展开色谱图，直至溶剂前沿移动至板长的

约四分之三处。将板从色谱箱中取出，在105°C下干燥10分钟。用丁醇中的0.2%茚三酮溶液喷洒板面，并在105°C下加热5分钟。测试溶液色

谱图中每个主峰的RF均对应于相应标准溶液所得色谱图中相应主峰的数值（根据标记活性物质的具体情况选择）。

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标签上指定的成分或原料。若测试溶液的色谱图出现过度条带，则按改良方法的操作步骤进行。

改良操作步骤：将测试溶液转移至15 mL离心管中，加入10 mL饱和苦味酸水溶液（1.2% ，w/v）。

涡旋振荡1分钟，离心10分钟，弃去上清液。用1mL水分次洗涤残留物，直至洗涤液中无黄色沉淀。弃去洗涤液，在50°C氮气流下干燥残留

物。将残留物溶于1mL丙酮中，加入1mL新配制的丙酮硫酸溶液（1:100），振荡混匀后离心5分钟，弃去上清液；再用1mL丙酮洗涤残留

物，短暂离心后弃洗液。重复洗涤步骤直至无黄色沉淀出现。在50°C氮气流下干燥残留物，将其溶于0.5 mL 0.1 N盐酸（改良测试溶液）

中。使用该改良测试溶液替代原测试溶液重复操作流程。改良测试溶液色谱图中各主峰的RF值均对应相应标准溶液色谱图中主峰的数值（具

体取决于标签中标注的有效成分）。

美国药典参考标准〈11 〉

美国药典标准品胞外素锌RS

美国药典新霉素硫酸盐RS

美国药典多粘菌素B硫酸盐RS

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<201> 薄层色谱鉴定试验

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GCCA2020通用章节——化学分析

（2020年版）

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