ASTM E2197-17 标准定量磁盘载体测试方法确定杀菌、杀病毒、杀真菌的作用......化学品的分枝杆菌杀灭及芽孢杀灭活性

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3.0 安心365 2026-04-28 3 1.86MB 13 页 160质量币
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本国际标准是根据世界贸易组织技术性贸易壁垒（TBT）委员会发布的《关于制定国际标准、指南和建议的原则》决定中确立的、国际公认的标准化原则制定的。
编号：E2197-17
国际的；全球性的
标准定量磁盘载体测试方法
确定杀菌、杀病毒、杀真菌的作用……
化学品的分枝杆菌杀灭及芽孢杀灭活性¹
本标准采用固定编号E2197发布；紧随编号后的数字表示首次采用的年份（如为修订版，则为最近一次修订的年份）。括号内
的数字表示最近一次重新批准的年份。
上标 ε（ε）表示自上次修订或重新批准以来的编辑更改。
引言
²
本文所述的定量测试方法采用直径为1厘米的不锈钢圆盘作为载体。该方法采用相同的基
本材料和程序，用于评估液体化学品灭活营养型细菌、病毒、真菌、分枝杆菌及细菌孢子的
能力（1-7）。 测试物质的性能标准、水硬度水平、土壤负载类型与强度、测试微生物及其
他测试条件可能因目标监管机构的不同而有所差异。
该基础测试方法亦可调整适用于其他尺寸相近的载体材料。
本检测方法的开发得益于美国环境保护署抗菌剂部门的财政支持。
1. 范围
1.1 本测试方法旨在评估受试物质对代表坚硬、无孔环
境表面及医疗器械的刷面不锈钢圆盘载体上营养菌、病
毒、真菌、分枝杆菌及细菌孢子（1-7）的灭活能力。该
方法还设计了存活菌落数，可与不少于三个对照载体的
平均值进行比较，以判定是否符合性能标准。为确保结
果的统计学评估准确性，测试接种物中的活菌数量应足
够高，以同时反映性能标准要求及实验结果中的变异因
素。
1.2 该测试方案不包含任何擦拭或摩擦操作，因此并非
专为测试湿巾而设计。
1.3
8
本测试方法应由接受过微生物学培训的人员，在专
为处理相应生物安全等级（ ）的传染性病原体而设计和
配备的设施中执行。
1.4 研究者的职责是确定是否符合《良好实验室规范》
（GLPs）的要求。
1本测试方法由ASTM E35委员会（负责农药、抗菌剂及替代控制
剂）管辖，并由其下属的E35.15抗菌剂分委会直接负责。
本版于2017年12月1日获批，2017年12月出版。最初于2002年获
批，上一版本最后修订于2011年，编号为E2197-11。DOI：10.1520/E
2197-17。
括号内加粗数字对应本标准末尾的参考文献列表。
需遵守相关规定并在适当情况下予以遵循（美国环保署（EPA）
提交材料适用《联邦法规》第40编第160部分，美国食品药品监督
管理局（FDA）提交材料适用《联邦法规》第21编第58部分）。
1.5 在 本 测 试 方 法 中 ， 所 有 应 用 均 采 用 国 际 单 位 制
（SI）单位；仅距离测量例外，该情况下使用英寸单
位，随后采用公制单位。
1.6
本标准并不旨在解决与其使用相关的所有安全问
题（如有）。用户有责任在使用前制定适当的安全、健
康及环境措施，并确定相关法规限制的适用性。
1.7
本国际标准的制定遵循了国际公认的标准原则
该标准体系确立于世界贸易组织技术性贸易壁垒（
TBT
）
委员会发布的《国际标准、指南和建议制定原则决定》
中。
2.参考文件
2.1 ASTM
标准：
3
A967/A967M化学钝化处理规范
不锈钢零件尺寸D1129；与水相关
的术语D1193；试剂用水规格
www.astm.org
3有关引用的ASTM标准，请访问ASTM网站 ，或联系
ASTM客户服务部门：service@astm.org。有关ASTM
标准年度汇编
卷
册信息，请参阅ASTM网站上该标准的文件摘要页面。
版权所有 OASTM International，地址：宾夕法尼亚州西康肖霍肯市巴尔港大道100号，邮政信箱C700，邮编19428-2959。美国
1
E2756与抗菌和抗病毒药物相关的术语
2.2 CFR
标准：
⁴
21 CFR 第58 部分：非临床实验室研究的实验室实践
40 美国联邦法规第160部分《良好实验室规范标准》
2.3 CEN
标准：
5
EN 10088-21J/2J不锈钢——第2部分：通用用途耐腐蚀
钢板材及带材的技术交付条件
3.术语
3.1
定义
——本文件中所用通用术语的定义
测试方法，请参阅术语E2756。
3.2
本标准专用术语定义：
3.2.1
载体，
n——接种了测试微生物的无生命表面或物
体。
3.2.2
洗脱液
，n——一种洗脱液，其中含有回收的微
生物。
3.2.3
洗脱液：
任何对测试微生物无害的溶液，该溶液
被添加到载体中，用于回收载体内部或表面的微生物。
3.2.4
中和作用，
n——一种抑制受试物质抗菌活性的过
程。该过程可通过稀释微生物/受试物质混合物和/或向其
中添加一种或多种化学中和剂来实现。
3.2.5
土壤负载物，
n——一种由一种或多种有机物质、
无机物质或两者组成的溶液，添加至测试生物体的悬浮
液中，用于模拟体内分泌物、排泄物或其他外来物质的
存在。
3.2.6
测试微生物，
n——指具有易于识别特征的微生
物。该微生物亦可称为替代微生物、模拟微生物或标记
微生物。
3.2.7
测试物质
，n—a含抗菌成分的制剂。
4.测试方法摘要
4.1 每个直径为1厘米的培养皿中接种10 μL含土壤负
载的测试微生物。接种物经干燥后，将培养皿置于无菌
塑料小瓶的内底面，随后与50 μL测试物质的使用稀释液
接触。接触时间和温度可根据实际需求调整。对照载体
则接种 50μL对测试微生物及其宿主细胞（如有）无害的
液体，其余处理步骤与测试载体相同。
4.2 对于针对营养型细菌、真菌、分枝杆菌及细菌孢
子的检测，需先对测试物质进行中和处理，随后洗脱接
种物。洗脱液及载体及其小瓶的后续冲洗液均需进行膜
过滤。将装有滤膜的培养板置于培养箱中培养，计数菌
落数量，并计算log10减少值。
⁴可从美国政府印刷局获取，地址：美国华盛顿特区西北国会街732号，邮
编：20401，邮政信箱： SDE ；网址：www.access.gpo.goV.
5由欧洲标准化委员会（CEN）提供，地址：比利时布鲁塞尔Ma-
rnix大道17号，邮编B-1000，
http://www.cen.eu
。
4.3 对于病毒检测，将洗脱液的适当稀释液接种至适宜
的细胞培养体系中，检测培养物的细胞病理学表现/感染
灶；感染灶通过最可能数（MPN）进行估算，或直接计
数为病灶/空斑，并计算其对数（log10）。
5.意义与用途
5.1 该测试的设计消除了活微生物因冲洗而流失的可能
性，因此只需比基于简单 MPN 估算的方法少得多的测试
载体，即可获得统计学上有效的数据。
5.2 该测试的严格性体现在以下三个方面：采用了土壤
负载、刷毛式不锈钢载体表面的微地形结构，以及许多
消毒应用中典型的较小测试物质与表面积比。因此，所
评估的测试物质在承受合理挑战的同时，仍能高效地从
接种载体中回收测试微生物。此外，基础测试中的金属
圆盘适用于多种活性成分。
5.3 载体的设计使得能够向每个载体中精确加入特定体
积的测试微生物（10μL）以及对照液或测试物质（50 μ
L）。
5.4 接种物置于每个培养皿的中心，而测试物质的体
积几乎覆盖整个培养皿表面，从而几乎完全消除了任何
微生物未被暴露的风险。
5.5 在所有测试中（病毒测试除外），在接触时间结束
时立即加入10毫升洗脱液/稀释液，可使测试物质达到
1:200的稀释度。虽然这一步骤本身可能足以抑制大多数
活性物质的杀菌活性，但测试方案允许在需要时向洗脱
液/稀释液中添加特定中和剂。除病毒测试外，膜过滤步
骤还能对测试载体中的全部洗脱液进行处理，从而能够
捕获并检测可能存在的少量存活微生物。随后用生理盐
水冲洗膜过滤器，可降低将任何抑制性残留物带入回收
介质的风险。必须通过使用少量测试微生物进行挑战试
验，来验证测试物质中和过程的有效性。
5.6 在病毒检测实验中，于接触时间结束时加入1毫升
缓冲液，可使测试物质达到1:20的稀释比例，同时保持
洗脱液体积足够小，以便在细胞培养体系中对大部分或
全部洗脱液进行滴定。需通过使用低感染单位数的测试
病毒对残留消毒剂负载进行攻击试验，以确认测试物质
的中和效果。由于该病毒检测系统属于间接检测法，因
此需要额外步骤验证：预先将相应细胞系暴露于任何残
留消毒剂或消毒剂/中和剂混合物后，不会干扰对低浓度
病毒攻击的检测结果（详见附录）。
注1——在5.5和5.6节中，为便于分配洗脱液，建议使用10毫升和1毫升
的体积，而非分别使用9.95毫升和950 μL。
2
5.7 本试验中的土壤负载物是由三种蛋白质（高分子量
蛋白质、低分子量肽类及黏液物质）组成的混合物，其
设计旨在模拟微生物杀灭化学品在实际现场条件下可能
遇到的体液分泌物、排泄物或其他外来物质。该土壤负
载物适用于本试验所涵盖的所有测试微生物。其组分易
于获取，且变异性远低于动物血清。
5.8
CaCO₃
若产品标签未明确标注使用蒸馏水或其他稀释剂，
则默认测试物质的稀释剂为自来水。由于自来水的水质
在地理分布和时间因素上存在显著差异，本测试方法采
用硬度符合规定且有文件记录的水质来配制测试物质的
使用稀释液——此类稀释液需在使用前用水进行稀释。
虽然建议使用硬度不低于300 ppm（ ）的水，但具
体使用前应参照当地法规关于硬水使用的相关规定。
5.9 本附件列出了常用于评估消毒剂对环境表面或医疗
器械杀菌活性的微生物种类清单。附件中还包含了每种
微生物的培养条件。根据产品标签要求及目标监管机构
的规定，可选择其中一种或多种微生物进行测试。若需
使 用 未 列 明 的 微 生 物 （ 例 如 在 乳 制 品 或 啤 酒 酿 造 行
业），必须提供明确的论证依据，并在测试报告中验证
并清晰说明所使用的培养基及生长条件的具体细节。
6.通用设备与实验室器具
6.1 空气
推移式移液管
（Eppendorf品牌或同等产品），容量
为100至1000 μL，配有一次性吸头。
6.2
分析天平，
用于称量化学物质并通过移液管标准化接种
物的输送量。
6.3
²
用于病毒培养的细胞培养瓶及其他塑料器皿，
（详见注
释2）：容量为25厘米和75厘米的塑料细胞培养瓶 ，用于细胞
培养及病毒混合液制备；用于测定病毒感染性的12孔或96孔塑
料培养板。
注2——塑料培养皿可在大多数实验室耗材供应商处购买。
6.4
离心机
，用于使测试微生物的细胞/孢子沉降，以
便进行浓缩、洗涤或两者兼用。
6.5
殖民地计数器
，例如魁北克殖民地计数器。
6.6
干燥器，
推荐尺寸为宽25厘米、深20厘米，内部装
有活性干燥剂，用于干燥载体上的接种物。
6.7
解剖显微镜，
用于检测金属盘表面形貌是否存在损
伤。
6.8
环境培养箱或孵育器；
用于将载体置于所需的测试
温度下。
6.9
用于培养基和试剂的过滤灭菌系统：
对于热敏感性
溶液的灭菌，需要采用膜或滤芯过滤系统（孔径为0.22
微米）。
6.10
夹钳，
可为直型或曲型；(1) 具有光滑尖端，用于
操作膜过滤器；(2) 用于拾取金属圆盘载体并将其置于塑
料瓶中。
6.11 储存培养基和添加剂需使用温度为-20±2℃的冷冻
柜；储存测试微生物储备液则需使用温度为-70℃或更低
的第二台冷冻柜。
6.12
玻璃器皿
：带侧臂的1升烧瓶及配套导管，用于
收集直径47毫米膜过滤器的滤液；250毫升锥形瓶用于培
养基。
6.13
血细胞计数板，
用于计数真菌分生孢子和/或用于
制备适合接种单层细胞所需的细胞数量。
6.14
热风烘箱
：一种温度为60℃的烘箱，用于清洁干
燥并灭菌玻璃器皿。
6.15
CO₂
CO₂
培养箱
包括普通培养箱、厌氧培养箱以及可在
5% 气氛中培养细胞培养物的 培养箱。若仅配备一
台普通培养箱，则需根据待测微生物的种类调整其温
度。
6.16
倒置显微镜
：一种配备10倍目镜及5倍、10倍和40
倍物镜的倒置显微镜，用于观察细胞培养物。
6.17
层流柜
属于 Ⅱ级（A型）生物安全柜。此类柜子
的正确维护与使用方法详见参考文献（8）。
6.18
细胞液氮储存：
用于细胞系储备液冷冻保存的专用液
氮容器及液氮供应系统。
6.19
磁力搅拌板与搅拌棒
，尺寸足够大，可容纳5升
烧杯或锥形瓶，用于配制培养基或其他溶液。
6.20
标记物
，用于实验室器具的永久标记。
6.21
用于捕获病毒以外测试微生物的膜过滤系统
，需
配备无菌的47毫米直径膜过滤器（孔径为0.22或0.45微
米）以及用于固定此类过滤器的玻璃、塑料或金属支
架。
6.22 pH
计；
用于测量缓冲液、洗脱液及测试制剂的pH
值。
6.23
微波炉，
用于融化琼脂覆盖层。
6.24
其他实验室用品
：移液枪头、用于储存细胞和病
毒储备液的塑料小瓶、稀释管。
6.25
轨道式振荡器
；用于在
枯草芽孢杆菌
培养液孵育
过程中对其进行振荡。
6.26
直径
150
毫米的培养皿（
Pyrex
玻璃材质）；用于
金属圆片的盛放及高压灭菌处理。
6.27
正位移移液管：
一种配备“柱塞”的移液管及移
液管尖端，可精确吸取10 μL体积的液体用于载体接种，
且不会产生使用空气置换移液管时常见的气溶胶。
6.28
冰箱；
一台温度为4±2℃的冰箱，用于储存培养
基、培养皿及试剂。
3

标签： #ASTM #化学 #测试

摘要：

本国际标准是根据世界贸易组织技术性贸易壁垒（TBT）委员会发布的《关于制定国际标准、指南和建议的原则》决定中确立的、国际公认的标准化原则制定的。编号：E2197-17国际的；全球性的标准定量磁盘载体测试方法确定杀菌、杀病毒、杀真菌的作用……化学品的分枝杆菌杀灭及芽孢杀灭活性¹本标准采用固定编号E2197发布；紧随编号后的数字表示首次采用的年份（如为修订版，则为最近一次修订的年份）。括号内的数字表示最近一次重新批准的年份。上标ε（ε）表示自上次修订或重新批准以来的编辑更改。引言²本文所述的定量测试方法采用直径为1厘米的不锈钢圆盘作为载体。该方法采用相同的基本材料和程序，用于评估液体化学品灭活营养...

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