美国药典 USP 2025〈62〉非无菌产品的微生物学检测：特定微生物的检测方法

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状态：当前状态为正式生效，生效日期为2025年2月12日
官方日期：2013年之前的官方日期
文件类型：通用章节
DocId：GUID-A68DE4C6-A898-490B-8198- C9FE1ADF1B60_1（英文版本）
DOI：https://doi.org/10.31003/ USPNF_M98802_01_01
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〈62〉非无菌产品的微生物学检测：特定微生物的检测方法
引言
下文所述的检测方法可确定在所述条件下可能被检出的特定微生物是否不存在或仅有限存在。
这些检测主要用于确定某种物质或制剂是否符合既定的微生物质量标准。在用于此类目的时，请遵循以下说明（包括需采集的样本数
量），并按以下方法解读检测结果。
可采用替代性微生物学检测方法（包括自动化方法），但须证明其与药典方法具有等效性。
一般程序
〈样品制备按照《非无菌产品的微生物学检查：微生物计数试验》 〉所述方法进行。
〈
如果待检产品具有抗菌活性，则应尽可能按照非无菌产品的微生物学检验：微生物计数试验 〉所述方法将其去除或中和。
〈
若使用表面活性物质进行样品制备，则必须证明其对微生物无毒性且与所使用的任何灭活剂相容，具体要求参见非无菌产品的微生物学检
查：微生物计数试验 〉。
培养基的促生长与抑制特性、试验方法的适用性及阴性对照
必须确定该检测方法在待测产品存在条件下检测微生物的能力。若检测性能或产品本身发生可能影响检测结果的变更，则需确认该方法的适用
性。
测试菌株的制备
请使用如下所述的标准化稳定测试菌株悬浮液。采用种子批次培养维持技术（种子批次系统），以确保用于接种的活微生物与原始主种子批次的传代次
数不超过五代。
需氧微生物
将各细菌测试菌株分别置于含有大豆-酪蛋白消化肉汤的培养容器中，或置于大豆-酪蛋白消化琼脂上，在30°至35°条件下培养18至24
小时。白色念珠菌测试菌株则分别置于沙氏葡萄糖琼脂或沙氏葡萄糖肉汤中，在20°至25°条件下培养2至3天。
金黄色酿脓葡萄球菌 例如 ATCC 6538、NCIMB 9518、CIP4.83或NBRC 13276
铜绿假单胞菌 例如 ATCC 9027、NCIMB 8626、CIP82.1 18或NBRC 13275
大肠杆菌 例如 ATCC 8739、NCIMB 8545、CIP53.126或NBRC 3972
肠沙门氏菌肠亚种鼠伤寒血清型，或作为替代名称： 例如 ATCC 14028
肠沙门氏菌肠亚种Abony血清型 例如 NBRC 100797、NCTC 6017 或CIP 80.39。
白念珠菌 例如 ATCC 10231、NCPF 3179、IP48.72或NBRC 1594
使用pH 7.0的缓冲氯化钠-蛋白胨溶液或pH 7.2的磷酸盐缓冲溶液制备测试悬浮液。若在2°C至8°C条件下储存，应在2小时内或24小时内使
用该悬浮液。
OFFICIAL
2025年2月12日下午2:11 USP- NF 〈62〉非无菌产品的微生物学检验：特定微生物检测
梭菌属
可 使 用 产 芽 孢 梭 菌 菌 株 ， 例 如 ATCC 11437（NBRC 14293、NCIMB 12343、CIP 100651） 或 ATCC 19404（NCTC 532 或CIP
79.3）。在30°至35°条件下，于专用于梭菌的强化培养基中，于厌氧环境中培养梭菌测试菌株24至48小时。作为制备并稀释新鲜产芽孢梭
菌营养细胞悬液的替代方案，可直接使用稳定的孢子悬液进行测试接种。该稳定孢子悬液可在2°至8°条件下保存，保存期限需经过验证。
阴性对照
为验证测试条件，需使用所选稀释剂替代测试制剂进行阴性对照实验。实验中不得出现微生物生长。在按照“产品测试”部分所述方法对
产品进行测试时，也必须进行阴性对照实验。若阴性对照实验失败，则需进行调查。
培养基的促生长与抑制特性
对每批预配培养基以及每批由脱水培养基或原料制备的培养基进行测试。验证相关培养基的适宜特性，具体如表1所述。
表1. 培养基的促生长、抑制生长及指示特性
测试/介质 财产 测试菌株
胆汁耐受性革兰阴性菌检测
肠杆菌富集培养基苔藓 促进生长的 大肠杆菌
铜绿假单胞菌
抑制性的 金黄色葡萄球菌
紫红色胆汁葡萄糖琼脂 促生长+指示性 大肠杆菌
铜绿假单胞菌
大肠杆菌检测
麦康凯肉汤 促进生长的 大肠杆菌
抑制性的 金黄色葡萄球菌
麦康凯琼脂 促生长+指示性 大肠杆菌
沙门氏菌检测
瓦西里阿迪斯沙门氏菌富集培养液报告
书促进生长的 肠沙门氏菌肠亚种鼠伤寒血清型
肠沙门氏菌肠亚种Abony血清型
抑制性的 金黄色葡萄球菌
木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂 促生长+指示性 肠沙门氏菌肠亚种鼠伤寒血清型
肠沙门氏菌肠亚种Abony血清型
铜绿假单胞菌检测
西曲胺琼脂 促进生长的 铜绿假单胞菌
抑制性的 大肠杆菌
金黄色葡萄球菌检测
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2025年2月12日下午2:11 USP- NF 〈62〉非无菌产品的微生物学检验：特定微生物检测
测试/介质 财产 测试菌株
甘露醇盐琼脂 促生长+指示性 金黄色葡萄球菌
抑制性的 大肠杆菌
梭菌检测
梭菌专用增强培养基 促进生长的
哥伦比亚琼脂 促进生长的
白色念珠菌检测
沙保罗葡萄糖肉汤 促进生长的 白色念珠菌
萨博罗葡萄糖琼脂 促生长+指示性 白色念珠菌
促生长特性检测（液体培养基）
将适量适宜培养基的一部分接种少量（不超过100 cfu）相应的微生物。在指定温度下培养，培养时间不得超过试验规定的最短时长。此
时应观察到与先前使用经测试且获批的培养基批次所获得结果相当的明显微生物生长。
促生长特性测试，固体培养基
〈
实施表面涂布法（详见非无菌产品的微生物学检查：微生物计数试验 〉章节下的平板计数法），将适量（不超过100 cfu）相应微生物
接种于每块平板。在指定温度下培养，培养时间不得超过试验规定的最短时长。此时微生物的生长情况应与先前使用经测试且获批的培养基
批次所获得的结果相当。
抑制特性测试（液体或固体介质）
将至少100 cfu的相应微生物接种于适宜培养基中。在指定温度下培养，培养时间不得短于试验规定的最长时间。试验微生物未出现生长
现象。
指示性特性测试
〈
采用表面扩散法（详见《非无菌产品的微生物学检验：微生物计数试验 〉章节下的平板计数方法），向每个平板接种少量（不超过100
cfu）相应的微生物。在规定的温度下，于试验指定的时间范围内进行培养。所得菌落的外观及指示反应与先前使用经测试且获批的培养基批
次所获得的结果具有可比性。
测试方法的适用性
对于每种待测试的新产品，均应按照“产品测试”相关段落所述进行样本制备。在混合时，将各测试菌株加入规定的生长培养基中。对
各测试菌株分别进行接种。接种后的测试样品中微生物数量应不超过100 cfu。
按照相关段落中关于产品测试的描述进行测试，并采用规定的最短孵育期。
必须采用“产品检测”部分所述的指示反应来检测指定微生物。
〈
该产品的任何抗菌活性均需对测试程序进行修改（详见非无菌产品的微生物学检查：微生物计数试验 〉中的“抗菌活性中和/消除”
部分）。
对于特定产品而言，若其针对规定检测微生物的抗菌活性无法被中和，则可推断该产品中不存在被抑制的微生物。
产品测试
耐胆汁的革兰氏阴性菌
样本制备与预孵育
〈
按照《非无菌产品的微生物学检查：微生物计数试验》〈 〉所述方法，使用不少于1克待检产品的1:10稀释液制备样本，但选用大豆-
酪蛋白消化肉汤作为稀释剂，混合后于20°至25°条件下培养足够时间以使细菌复苏，但避免促进微生物过度增殖（通常为2小时，不超过5小
时）。
缺勤测试
除非另有规定，应使用相当于1克产品（按样本制备和预孵育部分所述方法制备）的体积，接种至肠杆菌富集肉汤苔藓培养基中。于30°至35°C条件下孵育
24至48小时。随后在紫红胆汁平板上进行传代培养。
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2025年2月12日下午2:11 USP- NF 〈62〉非无菌产品的微生物学检验：特定微生物检测

标签： #无菌 #检测 #微生物

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状态：当前状态为正式生效，生效日期为2025年2月12日官方日期：2013年之前的官方日期文件类型：通用章节DocId：GUID-A68DE4C6-A898-490B-8198-C9FE1ADF1B60_1（英文版本）DOI：https://doi.org/10.31003/USPNF_M98802_01_01DOIRef:esw1v©2025USPC请勿分发〈62〉非无菌产品的微生物学检测：特定微生物的检测方法引言下文所述的检测方法可确定在所述条件下可能被检出的特定微生物是否不存在或仅有限存在。这些检测主要用于确定某种物质或制剂是否符合既定的微生物质量标准。在用于此类目的时，请遵循以下说明（...

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