GMP 洁净室沉降菌动态监测培养基适用性验证
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· · 中国医药工业杂志 Chinese Journal of Pharmaceuticals 2025, 56(12)
1570
《药品生产质量管理规范 (2010 年修订版 )》
(GMP)附录Ⅰ和 ChP 2020 年版 (ChP 2020)四部
通则 9205《药品洁净实验室微生物监测和控制指
导原则》都强调在洁净区采用在线和动态监测方法
GMP 洁净室沉降菌动态监测培养基适用性验证
王 霞，徐婷婷，张光华，宣 泽，姚 瑛 *
(北京市药品检验研究院，北京市疫苗检验中心，国家药品监督管理局仿制药研究与评价重点实验室，北京 102206)
摘要 ：该研究将洁净室沉降菌动态监测培养基暴露 4 h 后进行培养基适用性研究。参照《药品生产质量管理规范 (2010 年修
订版 )》(GMP)附录Ⅰ及《中华人民共和国药典》2020 年版 (ChP 2020)四部通则 9205 技术要求，
选择在生物安全柜内将 6
组(每组 40 块)直径 90 mm 的胰酪大豆胨琼脂培养基 (TSA)预灌装平板，分别暴露 30 min 和4 h，称量质量后计算失水率，
并按照 ChP 2020 四部通则 1105 采用涂布法进行培养基适用性验证。结果表明，在温度 17 ～26 ℃、相对湿度 12％～ 63％、
下降气流流速 0.32 ～0.33 m/s、流入气流速度 0.54 ～0.56 m/s 的条件下，培养基失水率最高为 27.84％，各验证菌回收比值
均在 0.5 ～2.0，可确认洁净室沉降菌动态监测培养基暴露 4 h，符合 ChP 2020 四部通则 1105 培养基适用性验证要求。
关键词 ：洁净室 ；沉降菌动态监测 ；培养基失水率 ；回收试验 ；培养基适用性
中图分类号 ：
R917 ；
TQ460.8+2 文献标志码 ：
A 文章编号 ：
1001-8255(2025)12-1570-06
引用 ：王 霞, 徐婷婷 , 张光华 , 等．GMP 洁净室沉降菌动态监测培养基适用性验证 [J]．中国医药工业杂志 , 2025, 56(12):
1570-1575．DOI ：10.16522/j.cnki.cjph.2025.12.011
Validation of the Applicability of Culture Media for Dynamic Monitoring of
Settling Microbes in GMP Cleanrooms
WANG Xia, XU Tingting, ZHANG Guanghua, XUAN Ze, YAO Ying*
(NMPA Key Lab. of Research and Evaluation of Generic Drugs, Beijing Center for Vaccine Control, Beijing Institute for Drug Control,
Beijing 102206)
ABSTRACT: The applicability of culture media after 4-hour exposure for dynamic monitoring of settling microbes
in cleanrooms was validated in this study. Referring to the technical requirements of Appendix Ⅰ of “Good Manufacturing
Practice (2010 Revision)”(GMP) and Chinese Pharmacopoeia 2020 Edition(ChP 2020) Part Ⅳ, General Chapter 9205,
six groups of 40 prelled plates(with 90 mm diameter) containing tryptic soy agar(TSA) were separately exposed in a
biosafety cabinet for 30 min and 4 h, respectively. After exposure, the plates were weighed to calculate water loss rate, and
media applicability was validated using the spread plate method in accordance with the ChP 2020 General Chapter 1105.
The results showed that under the conditions of temperature of 17 - 26 ℃, relative humidity of 12％ - 63％, descending
airow velocity of 0.32 - 0.33 m/s, and inow airow velocity of 0.54 - 0.56 m/s, the maximum water loss rate of the
medium was 27.84％, and the recovery ratios of all tested bacteria ranged from 0.5 to 2.0. This study conrmed that the
4-hour exposure of culture medium for dynamic monitoring of settled plates in cleanrooms met the requirements of General
Chapter 1105 of the ChP 2020 .
Key Words: cleanroom; dynamic monitoring of settling microbes; water loss rate of culture media; recovery study;
applicability of culture media
收稿日期： 2025-05-09
作者简介
： 王 霞，本科，从事医药环境洁净领域质量研究及微生
物等相关检测工作。
通信作者
：姚 瑛，副主任药师，从事药品、保健食品及洁净环境
质量研究工作。
中国医药工业杂志 Chinese Journal of Pharmaceuticals 2025, 56(12) · ·
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实施微生物监测。其中，沉降菌动态监测培养基暴
露时间均为 4 h，同一位置可使用多个沉降碟连续
监测并累计计数 [1—3]。使用一个沉降碟暴露 4 h 或
多个沉降碟连续监测，可能会因培养基失水而影响
微生物正常生长 [4]。欧盟GMP 和WHO 规定沉降
碟最多暴露 4 h，其后应按要求更换，具体暴露时
间的确定应基于验证研究 (包括微生物回收研究 )，
暴露时间不应对所用培养基的适用性产生任何负面
影响。《药品 GMP 指南 ：无菌药品》中要求无菌
药品沉降碟暴露时间应不少于 30 min、不大于 4 h，
并应对沉降碟的暴露时间进行确认，以保证暴露后
的培养基不会因失水等原因而影响微生物的正常生
长。目前，对洁净环境培养基暴露 4 h时的失水率
及验证培养基适用性的研究较少，仅颜宾等 [5]在
对沉降碟暴露时间的考察中利用 3个平皿对 3株菌
进行了考察。
本研究根据《医药工业洁净室 (区)沉降菌的
测试方法 ：GB/T 16294—2010》[1]及ChP 2020 四部
通则 1105《非无菌产品微生物限度检查 ：微生物计
数法》的要求，对沉降菌暴露时间、失水率和微生
物回收进行研究，以期为 GMP 洁净室沉降菌的动态
监测提供参考。
1 仪器与试药
XSR4001S/A 型电子天平 (瑞士 Mettler Toledo 公司 )；
610 型温湿度计 (德国 Testo 公司 )；
AP500 型风速仪 (美国
TSI 公司 )。
胰酪大豆胨琼脂培养基 (tryptic soy agar，TSA，北京奥
博星生物技术有限责任公司，批号 20241021)。
枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)[CMCC(B)63501]、铜
绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)[CMCC(B)10104]、
金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)[CMCC(B)26003]、
大肠埃希菌 (Escherichia coli)[CMCC(B) 44102]、白念珠菌
(Candida albicans)[CMCC(F)98001]、黑曲霉(Aspergillus
niger)[CMCC98003]，以上菌株均购自中国食品药品检定研
究院，菌株传代次数均为第 3代。
2 方法与结果
2.1 试验环境
2.1.1 试验区域
设置生物安全柜的下降气流流速 0.32 ～0.33 m/s，
流入气流速度 0.54～0.56 m/s。GMP附录 1《无菌药品》
对单向流风速的要求为 ：A级区域的风速为 0.36 ～
0.54 m/s，高于其他级别的洁净区。而风速是造成培
养基失水的重要因素，风速越高，培养基脱水越多。
按照风险分析原则，试验区域选择在安全柜中。生
物安全柜还能够提供 A级环境，防止暴露过程中的
微生物污染。
2.1.2 试验条件
不同洁净室的温度、相对湿度控制要求不同。
日常洁净室温度控制在 18 ～26 ℃，相对湿度控制
在45％～ 65％。根据产品的生产需求，相对湿度最
低可控制在 30％。由于相对湿度对培养基暴露失水
率的影响较大，应尽量选择相对湿度低的环境条件
进行测试。本实验室能达到的最低湿度为 12％，故
选用。
2.2 TSA 平板暴露试验
提前 0.5 h开启安全柜，并开启紫外灯消毒。为
避免偶然性、考察重复性，同时兼顾安全柜承载量，
每株菌每个暴露时间段选取 20 个平皿。取 20 个平
板为 1组，共2组，对每个平板上做标记。常温放
置0.5 h 时对每个平板进行称量，记作初始质量。
将40 个TSA 平板均匀铺设在操作台上，打开
平板盖，按照每排 8个，放置 5排。编号为 1～12
的平板处于垂直单向流 (风速 0.32 ～0.33 m/s)环境，
编号为 13 ～20 的平板处于风速较大 (风速 0.54 ～
0.56 m/s)位置，具体放置位置如图 1所示。放置完
成后开始计时，分别暴露 30 min 和4 h ；收 集 2组
平板进行称量。每次试验 1种菌株，
共进行 6组试验，
图1 平板放置示意图
Fig.1 Schematic Diagram of Culture Plate Placement
暴露30 min；
暴露4 h。
1
1 20
20
13
1
2
3
5
7
19
4
15
14
6
8
10
11
16 18
12
20
13
1
2
4
15
9
17
19
7
5
3
14
6
8
10
11
9
16 18
12
20
17
～
～
：
：
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按ChP 2020 四部通则 1105 要求进行操作。
2.2.1 金黄色葡萄球菌暴露试验结果
在环境温度 21 ℃、相对湿度 46％的条件下，
取菌悬液 100 μL(含金黄色葡萄球菌 50 ～100 cfu)。
分别对暴露 30 min 和4 h 的40 个TSA 平板进行涂
布接种，于 33 ℃培养 3 d，逐日观察。计算暴露 4 h
平板相对于暴露 30 min 平板的微生物回收菌落数，
结果如图 2所示。金黄色葡萄球菌暴露 4 h 与暴露
30 min 的回收比值均为 0.5 ～2。
图2 金黄色葡萄球菌 TSA 平板的暴露失水率及菌落数
Fig.2 Exposure Water Loss Rates and Colony Numbers of
Staphylococcus aureus TSA Plates
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
0
20
40
60
80
100
120
140
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
失水率
/
％
平皿编号
菌落数/cfu
—暴露30 min菌落数
；
—暴露4 h菌落数
；
—暴露30 min失水率
；
—暴露4 h失水率。
2.2.2 白念珠菌暴露试验结果
在环境温度 21 ℃、相对湿度 46％的条件下，
取菌悬液 100 μL(含白念珠菌 50 ～100 cfu)，分别
对暴露 30 min 和4 h的40 个TSA 平板进行涂布接种，
于33 ℃培养 5 d，逐日观察。计算暴露 4 h 平板相
对于暴露 30 min 平板的微生物回收菌落数，结果如
图3所示。同样，白念珠菌暴露 4 h 与暴露 30 min
的回收比值均为 0.5 ～2。
2.2.3 大肠埃希菌暴露试验结果
在环境温度 19 ℃、相对湿度 12％的条件下，取
菌悬液 100 μL(含大肠埃希菌 50 ～100 cfu)，分别
对暴露 30 min 和4 h 的40 个TSA 平板进行涂布接种，
于33 ℃培养 3 d，逐日观察。计算暴露 4 h 平板相
对于暴露 30 min 平板的微生物回收菌落数，结果如
图4所示。大肠埃希菌暴露 4 h 与暴露 30 min 的回
收比值也均为 0.5 ～2。
2.2.4 枯草芽孢杆菌暴露试验结果
在环境温度 24 ℃、相对湿度 12％的条件下，取
菌悬液 100 μL(含枯草芽孢杆菌 50 ～100 cfu)。分
别对暴露 30 min 和4 h 的40 个TSA 平板进行涂布
接种，于 33 ℃培养 3 d，逐日观察。计算暴露 4 h 平
板相对于暴露 30 min 平板的微生物回收菌落数，结
果如图 5所示。枯草芽孢杆菌暴露 4 h 与暴露 30 min
的回收比值均为 0.5 ～2。
2.2.5 黑曲霉暴露试验结果
在环境温度 23 ℃、相对湿度 63％的条件下，取
菌悬液 100 μL(含黑曲霉 30 ～50 cfu)，分别对暴露
图3 白念珠菌 TSA 平板的暴露失水率及菌落数
Fig.3 Exposure Water Loss Rates and Colony Numbers of
Candida albicans TSA Plates
图4 大肠埃希菌 TSA 平板的暴露失水率及菌落数
Fig.4 Exposure Water Loss Rates and Colony Numbers of
Escherichia coli TSA Plates
0
5
10
15
20
25
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
平皿编号
失水率/％
菌落数
/
cfu
—
暴露30 min菌落数；
—
暴露4 h菌落数；
—
暴露30 min失水率；
—
暴露4 h失水率。
失水率/％
菌落数
/
cfu
—
暴露30 min菌落数；
—
暴露4 h菌落数；
—
暴露30 min失水率；
—
暴露4 h失水率。
0
5
10
15
20
25
30
0
10
20
30
40
50
60
70
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
平皿编号
摘要：
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1570《药品生产质量管理规范(2010年修订版)》(GMP)附录Ⅰ和ChP2020年版(ChP2020)四部通则9205《药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则》都强调在洁净区采用在线和动态监测方法GMP洁净室沉降菌动态监测培养基适用性验证王 霞，徐婷婷，张光华，宣 泽，姚 瑛*(北京市药品检验研究院，北京市疫苗检验中心，国家药品监督管理局仿制药研究与评价重点实验室，北京102206)摘要：该研究将洁净室沉降菌动态监测培养基暴露4h后进行培养基适用性研究。参照《药品生产质量管理规范(2010年修订版)》(GMP)附录Ⅰ及《中华人民共和国药典》2020年版(ChP2020)四部通则9205技...
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作者：大傻蛋
分类：实用文档
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时间：2026-06-28
